pEGFP-N3-LPL重组真核表达载体的构建及在Vero细胞中的表达

摘要：

目的：构建贵州白香猪LPL基因与增强型绿色荧光蛋白基因的融合表达载体pEGFP-N3-LPL，转染Vero细胞，观察重组质粒的表达．方法：采用HindⅢ和BamI-R两种限制性内切酶获得LPL基因编码区片段和pEGFPN。线型载体，将目的片段与该载体连接、转化、挑取阳性克隆，进行菌落PCR、双酶切及测序鉴定．使用Lipofectamine2000将重组质粒转染Vero细胞，观察细胞中绿色荧光蛋白的表达并对其进行mRNA检测．结果：成功构建重组真核表达载体pEGFP-N3-LPL，经mRNA检测，实验组在1500bp处出现特异性条带，说明重组载体已在Vero细胞中获得表达．结论：本试验构建的真核细胞表达载体pEGFP-N3-LPL，为进一步阐明LPL基因与肌内脂肪沉积间的生物学作用机制奠定了基础．

关键词：脂蛋白酯酶、pEGFP-N3、载体、Vero细胞、真核表达、荧光检测

所属期刊栏目：34

分类号：Q814.9(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家科技部转基因生物新品种培育科技重大专项子项目2009ZX08009-139B;贵州省动物转基因研究平台建设基金资助项目Z093159;贵州大学研究生创新基金资助项目校研农2010021

在线出版日期：2012-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：40-45