菜心ISSR-PCR反应体系的优化

摘要：

以菜心(Brassica campestris L. ssp. Chinensis Var. utilis Tssen. et Lee.)为材料, 对影响ISSR-PCR扩增结果的因素如Mg2+、 Taq DNA聚合酶、 dNTPs、 Primer、模版DNA的浓度及引物退火温度、延伸时间和循环次数进行了探讨, 确立了适合菜心ISSR-PCR分析的最佳反应体系和PCR扩增参数: 在25 μL反应体系中含10×buffer 2.5μL, 2.0 mmol/L Mg2+, 0.5 U Taq DNA聚合酶, 0.2 mmol/L dNTPs, 0.5 μmol/L引物, 30 ng模板DNA. PCR扩增程序: 94 ℃预变性3 min; 94 ℃变性1 min, 49.7～56 ℃退火(退火温度随引物不同而定)1 min, 72 ℃延伸45 s, 40个循环; 72 ℃延伸5 min.

关键词：菜心、简单序列重复间区(ISSR)、反应体系

所属期刊栏目：29

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广东省自然科学基金B1010412

在线出版日期：2008-01-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：129-133