Twist基因RT-PCR检测方法的建立

摘要：

目的 建立Twist基因的逆转录聚合酶链式反应(Reverse tran scription polymerase chain reaction,RT-PCR)条件,为探讨Twist功能学研究奠定方法学基础.方法 根据Genebank中的Twist(NM_000474)基因序列设计引物,以GAPDH为内参照基因(NM_002046),用RNA simple Total RNA kit提取培养的肾癌细胞总RNA,按照Quantseript RT kit Quant cDNA第一链合成试剂盒说明书合成cDNA,PCR扩增操作按照TAKARA公司的LA Taq with GC Buffer PCR试剂盒说明书,设置PCR反应体系并优化扩增反应条件,琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果.结果 采用TAKARA的LA Taq with GC buffer PCR试剂盒并通过PCR扩增条件的优化,成功建立了Twist基因的RT-PCR方法,在肾癌细胞系786-0中扩增出大小为150bp左右清晰的目的条带.结论 成功摸索出了具有复杂二级结构、富含GC的Twist基因的RT-PCR扩增方法,并证明在肾癌细胞系786-0中存在Twist基因的特异性表达.

关键词：肿瘤、Twist基因、RT-PCR

所属期刊栏目：12

分类号：R33(人体生理学)

资助基金：四川省教育厅科研项目08ZA091

在线出版日期：2010-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：625-627