猪流行性腹泻病毒解旋酶Nsp13表达纯化及其RNA解旋活性鉴定

摘要：

旨在可溶性表达并纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)解旋酶Nsp13,并验证表达纯化得到的PEDV Nsp13 蛋白具有RNA解旋活性.将pET28a(+)-PEDV Nsp13 重组质粒转化到大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中,利用终浓度 0.5 mmol/L的IPTG在 18℃条件下诱导 16 h,收集诱导后的菌体,超声破碎并收集其上清液,通过镍亲和层析技术获得纯化后的PEDV Nsp13;设计RNA底物,并建立体外解旋反应体系,验证蛋白的RNA解旋活性,并在相同时间内探究不同温度条件下PEDV Nsp13 蛋白对RNA的解旋情况,进一步验证其活性.结果表明,在大肠杆菌系统中可溶性表达了PEDV Nsp13 蛋白,纯化后蛋白浓度可达 0.9 mg/mL;通过体外解旋试验,验证了PEDV Nsp13 蛋白具有ATP依赖的RNA解旋酶活性,并发现PEDV Nsp13 蛋白的RNA解旋酶活性在一定范围内随解旋温度的升高而提高.本研究结果为进一步深入研究PEDV Nsp13 的RNA解旋作用机制奠定了基础.

关键词：PEDV、Nsp13、可溶性表达、蛋白纯化、RNA解旋活性

所属期刊栏目：56

分类号：S852.23(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;中国博士后基金面上基金项目;江苏省博士后科研资助项目

在线出版日期：2024-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：33-38