基于牛支原体P48蛋白间接ELISA检测方法的建立
为了建立一种准确快速的牛支原体(Mycoplasma bovis)抗体检测方法,对牛支原体P48 蛋白进行原核可溶性表达,采用SDS-PAGE、Western blot对蛋白进行鉴定,将鉴定正确的P48 重组蛋白作为抗原,对影响ELISA的各个因素进行方阵优化,建立间接ELISA检测方法,对其特异性、敏感性、重复性进行测试,并进行临床样品检测.结果显示:抗原包被浓度为 5 μg/mL,4℃包被过夜;10%马血清为最佳封闭液,封闭时间为2h;一抗最佳稀释度为1 ∶ 160,孵育时间为1h;酶标二抗最佳稀释度为1 ∶ 12 000,孵育时间为30 min;最佳显色时间为20 min.表达纯化的P48 蛋白可以与牛支原体血清、乳样发生特异反应,建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,与商品化牛支原体ELISA抗体检测试剂盒总体符合率为91.11%.结果表明,本研究建立了一种特异性、敏感性、重复性良好的牛支原体抗体间接ELISA检测方法,为牛支原体病防控及抗体水平检测提供了一种有效方法.
牛支原体、P48蛋白、原核表达、ELISA
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S852.62(动物医学(兽医学))
国家重点研发计划2018YFD0501403
2023-10-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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