原花青素下调miR-181a抑制颗粒细胞氧化损伤的作用机制
旨在研究葡萄籽原花青素(grape seed procyanidins,GSP)抑制颗粒细胞氧化损伤的作用及其可能机制.腹腔注射 3-硝基丙酸(3-nitro-propionic acid,3-NP)诱导小鼠卵泡氧化损伤,并补充GSP进行干预处理;体外分离培养小鼠卵巢颗粒细胞,通过抑制或过表达miR-181a,研究原花青素B2(grape seed procyanidin B2,GSPB2)通过下调miR-181a抑制颗粒细胞氧化损伤的作用.采用定量PCR方法检测miR-181a表达水平,应用四甲基偶氮唑盐(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,利用免疫组化法检测活化天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3),应用酶标仪法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性,采用双荧光素酶报告基因检测 miR-181a 和转化生长因子 β 受体Ⅰ(TGFBR1)的靶向调控关系,使用原位末端标记法(TUNEL)染色检测颗粒细胞凋亡情况,应用Western blot法检测TGFBR1 蛋白水平.结果显示:在动物试验中,与对照组相比,3-NP组颗粒细胞活力显著降低(P＜0.05);同时caspase-3 活性、cleaved caspase-3 蛋白及miR-181a表达明显升高(P＜0.05);而GSP干预处理可扭转上述各指标的改变(P＜0.05).双荧光素酶报告试验结果显示,TGFBR1 为miR-181a的靶基因;进一步分析发现,与对照组相比,miR-181a 模拟物转染后 TGFBR1 蛋白表达和细胞活力均显著降低(P＜0.05),而 miR-181a 抑制剂转染后TGFBR1 蛋白表达和细胞活力均显著升高(P＜0.05).在细胞试验中,与对照组比较,H2 O2 组细胞中miR-181a表达升高,TGFBR1 表达降低(P＜0.05),细胞活力下降,caspase-3 活性和细胞凋亡率均显著升高;而GSPB2 预处理可扭转上述各指标的改变(P＜0.05).综上,GSP可抑制颗粒细胞的氧化损伤,其作用可能是通过抑制miR-181a表达而调控TGFBR1 表达实现.
葡萄籽原花青素、miR-181a、转化生长因子β受体Ⅰ、颗粒细胞、氧化损伤
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S852.2(动物医学（兽医学）)
国家重点研发计划;河南省优秀青年科学基金项目;河南省农业科学院自主创新项目;河南省科技攻关项目;河南省科技攻关项目;河南省农业科学院科技创新团队项目
2023-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
29-36
