牛支原体脂蛋白LppB的多克隆抗体制备及对天然蛋白识别分析

摘要：

旨在克隆牛支原体脂蛋白LppB基因,并进行原核表达与纯化,制备其多克隆抗体,研究其对天然蛋白的识别能力.以牛支原体PG45、ZYJ5及GT01株基因组DNA作为模板,PCR扩增LppB基因,测序并比对分析;将合成的pET-30a-LppB质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达产物用Ni-NTA纯化,Western blot方法验证纯化重组蛋白,测定其反应原性;将纯化蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,并测定其ELISA效价,Western blot测定多克隆抗体对牛支原体LppB的识别.结果显示:PCR扩增的LppB基因全长约1 860 bp,与预期大小相符;LppB主要为可溶性表达,大小约为74kDa,经Ni柱纯化后获得纯化蛋白,LppB蛋白具有良好的反应原性;制备出小鼠抗LppB多克隆抗体,ELISA效价为1∶25 600,能够识别天然LppB蛋白.本研究成功制备出牛支原体重组LppB蛋白及其多克隆抗体,为LppB功能研究奠定基础.

关键词：牛支原体、脂蛋白、LppB、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：55

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：甘肃省重点人才项目;元亨人才计划项目;兰州兽医研究所所长基金项目

在线出版日期：2023-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：108-113