非洲猪瘟病毒多重PMA-qPCR检测方法的建立及应用

摘要：

本研究利用叠氮溴化丙锭(PMA)与多重荧光定量PCR(qPCR)技术相结合,建立了一种可以实现非洲猪瘟病毒(African swine fever vi-rus,ASFV)感染性与非感染性(活/死病毒)鉴别的检测方法.通过对ASFVp72、CD2v、MGF110-14L基因保守序列设计特异性引物及探针,建立p72、CD2v、MGF110-14L基因的多重qPCR检测方法.结果显示,本研究建立的多重qPCR检测方法具有较强特异性,与其他常见猪病毒性原无交叉反应;同时,该方法具有较高灵敏度,p72、CD2v、MGF110-14L基因的重组质粒标准品最低检出限均为102 copies/μL.为弥补qPCR技术不能有效区分样品中活/死病毒的缺陷,本研究将构建的多重qPCR与PMA技术相结合.当加入PMA终浓度为10 μg/mL、暗孵育10 min、光照强度40 W、光照15 min时,PMA能够抑制灭活病毒基因的扩增且对活病毒基因的扩增无影响;对比普通qPCR与多重PMA-qPCR的灵敏度可知,两者的灵敏度均为102 copies/μL;将多重PMA-qPCR方法用于23份实际样品检测,结果显示,检测活病毒的准确率为100％,说明该方法能有效区分临床样品中具有感染性的ASFV.

关键词：非洲猪瘟病毒、多重PMA-qPCR、基因缺失株、感染性病毒

所属期刊栏目：55

分类号：S852(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;国家重点研发计划;海南省科技专项;江苏省农业科技自主创新基金项目;三亚市南京农业大学研究院指导基金项目

在线出版日期：2023-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：93-101