猪A群轮状病毒VP6单克隆抗体的制备和初步鉴定

摘要：

旨在通过RT-PCR扩增猪A群轮状病毒(group A rotavirus,RVA)VP6基因节段,并克隆至pET28a-SUMO,构建原核表达载体pET28a-SUMO-VP6,将该重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导、镍柱亲和层析纯化以获得重组蛋白SUMO-VP6,Western blot验证该重组蛋白能够与小鼠抗轮状病毒血清反应.将该重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,Western blot和间接免疫荧光验证阳性杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体与RVA的反应性.经3轮亚克隆最终获得一株能稳定分泌针对VP6蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株5G9,其分泌的单抗亚类为IgGI,轻链类型为Kappa,制备的小鼠腹水效价可达1:4 096 000,能够与不同基因型的RVA反应,同时不与常见的猪腹泻相关病毒反应,为未来猪RVA相关基础研究、临床血清学检测方法的开发奠定了基础.

关键词：猪A群轮状病毒、单克隆抗体、VP6蛋白

所属期刊栏目：55

分类号：S852.659(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;国家自然科学基金;江苏省杰出青年基金

在线出版日期：2023-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：79-85