鸡毒害艾美耳球虫表面抗原基因(EnSAG)的克隆表达及其免疫保护力

摘要：

为了研究鸡毒害艾美耳球虫表面抗原基因(EnSAG)的功能,以毒害艾美耳球虫(扬州株)第二代裂殖子的总RNA为模板,RT-PCR扩增其EnSAG,连接至pGEM-T-Easy载体,鉴定后构建pET28a(+)-EnSAG表达载体,转化至大肠杆菌BL21,鉴定后进行诱导表达和纯化.用纯化重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗EnSAG蛋白的多克隆抗体.利用多克隆抗体,用Western blot技术检测子孢子和第二代裂殖子中的天然EnSAG蛋白.用重组蛋白按高剂量(200μg/羽)、中剂量(100μg/羽)和低剂量(50μg/羽)免疫雏鸡,同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照,以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数(ACI)为指标,评价重组蛋白的免疫保护力.结果显示:该基因全长768 bp,编码255个氨基酸,分子质量24.63 ku;重组蛋白大小约为30 ku,以包涵体形式为多,能被组氨酸单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别;在第二代裂殖子中检测到天然EnSAG蛋白,其分子质量大约为27 ku.各试验组的成活率均为100％;免疫组的平均增重增加,病变记分显著降低(P＜0.05);低剂量组相对增重率最高(86.19％);高剂量组卵囊减少率(61.54％)和ACI值(160.03)最高.本研究结果为进一步探析EnSAG蛋白的功能以及鸡球虫病亚单位疫苗研制奠定了基础.

关键词：毒害艾美耳球虫、表面抗原基因、克隆、表达、免疫保护力

所属期刊栏目：54

分类号：S855.9(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;江苏省高校优势学科建设三期工程项目;江苏省高等学校大学生创新创业训练计划项目

在线出版日期：2022-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：122-128