猪源T细胞免疫球蛋白黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)多克隆抗体制备与鉴定

摘要：

为了探究猪源T细胞免疫球蛋白黏蛋白域蛋白-1(sTIM-1)的生物学功能,制备sTIM-1多克隆抗体,通过软件分析sTIM-1蛋白抗原表位及亲水性,并设计引物,以sTIM-1基因为模板扩增sTIM-1黏蛋白功能域编码基因(sTIM-1-M),成功构建了重组表达质粒pET28a-sTIM-1-M,并在大肠杆菌Rosetta 2中诱导表达.以纯化的重组蛋白sTIM-1-M与佐剂混合免疫新西兰大白兔制备多抗血清.SDS-PAGE及Western blot证实了该重组蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达,分子量约为36kDa.经Western blot与免疫荧光试验(IFA)验证sTIM-1多抗血清可特异性识别293T细胞表达的sTIM-1.免疫沉淀(IP)结果显示制备的多抗血清可与sTIM-1蛋白互作.以上数据表明本研究制备的sTIM-1多克隆抗体具有良好的反应性和特异性.sTIM-1多克隆抗体的制备为进一步研究sTIM-1参与病毒入侵细胞的机制奠定了基础.

关键词：猪源TIM-1、黏蛋白功能域、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：54

分类号：S852.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2016YFD0500402

在线出版日期：2022-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：116-121