口蹄疫病毒3B蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备

摘要：

为了深入研究口蹄疫病毒3B蛋白的结构及功能,本研究原核表达了3B蛋白并制备了针对3B蛋白的多克隆抗体.试验采用PCR方法扩增了口蹄疫病毒3B蛋白基因,并将其克隆到pET28a载体上,构建了重组质粒pET28a-3B,将其转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达.经过Ni-NTA琼脂糖亲和层析法初步纯化及Millipore超滤浓缩进一步纯化,将其免疫试验动物新西兰大白兔后制备出了抗3B蛋白的多克隆抗体.通过ELISA检测了该多抗的效价,Western blot试验检测了其反应性,通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验检测了该多抗的应用性.结果表明:该抗体的效价为1 ∶ 512 000,反应性良好;IFA试验和Western blot试验中可以检测到过表达后定位于细胞核和细胞质中的3B蛋白,也可以检测到在真核细胞中过表达的3B蛋白.说明本研究制备的口蹄疫病毒3B蛋白多克隆抗体可以作为开展该病毒相关研究的重要材料.

关键词：口蹄疫病毒、3B蛋白、原核表达、蛋白纯化、多克隆抗体

所属期刊栏目：53

分类号：S855(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;山东省高等学校优势学科创新团队培育计划

在线出版日期：2021-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：109-114