山羊伪结核棒状杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用

摘要：

为了快速检测无临床症状的山羊是否感染山羊伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis),根据GenBank中伪结核棒状杆菌磷脂酶D(phospholipase D,PLD)基因序列,分别设计1对特异性引物和TaqMan探针,经过反应条件和体系优化,测定特异性、敏感性和稳定性,建立山羊伪结核病TaqMan荧光定量PCR检测方法,并对54份临床样品进行检测.结果显示:建立的山羊伪结核棒状杆菌方法具有很好的特异性,在20 μL扩增体系中,引物浓度为0.20 μmol/mL,探针浓度为0.45 μmol/mL,退火温度59℃时最佳;最低可检测出4.6× 102个拷贝数的细菌DNA,标准曲线相关系数是0.996.同时,对TaqMan荧光定量PCR和常规PCR进行了比较,前者的敏感性是后者的1 000倍;对54份临床样品进行检测,TaqMan荧光定量PCR检出的阳性率为68.5％ (37/54),常规PCR检出的阳性率为53.7％ (29/54).研究表明:TaqMan荧光定量PCR法检出率较高,有特异、敏感且快速的特点,适用于临床样品的检测.

关键词：伪结核棒状杆菌、磷脂酶D基因(PLD)、实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：50

分类号：S855.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：昆明市西山区科技项目;国家肉羊产业技术体系项目

在线出版日期：2018-11-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：82-87