猪skMLCK基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率测定

摘要：

为了构建猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(skMLCK)基因有效短发夹RNA (shRNA)的慢病毒载体,筛选出最佳干扰效率的序列,采用RNAi技术,设计并合成3条siRNA干扰序列,插入到慢病毒穿梭质粒(hU6-CMV-puror-PloyA)上,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,收集病毒上清并进行病毒滴度的测定,将其转染小鼠C2C12细胞,分别用实时定量PCR和Western blot方法检测细胞中skMLCK基因mRNA和蛋白的表达.结果显示:PCR扩增和测序分析结果显示靶向skMLCKRNAi慢病毒载体构建成功;转染小鼠C2C12细胞后,skMLCK基因mRNA和蛋白均受到不同程度抑制,实时定量PCR显示,抑制率分别为(29.2±4.43)％、(76.4±7.33)％、(20.0±1.8)％;Western blot显示,抑制率分别为(29.6±5)％、(42.4±1.6)％、(34.3±1.2)％.结论:成功构建猪skMLCK基因有效shRNA的慢病毒载体,确定干扰载体-2(skMLCK-RNAi-2)具有最佳干扰效果,证实skMLCK基因RNAi慢病毒载体能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为进一步研究该基因与肌肉肉质性状的关系奠定了基础.

关键词：skMLCK基因、RNA干扰、慢病毒载体、转染

所属期刊栏目：48

分类号：S852.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金31272415/C170102;辽宁医学院奥鸿博泽项目AH2014007

在线出版日期：2016-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：70-73