水牛ASAH1基因克隆分析及其真核表达载体构建

摘要：

为了阐明水牛ASAH1基因在水牛卵泡发生和胚胎发生过程中的作用及分子机制,采用RT-PCR及载体构建技术对ASAH1进行了研究.结果表明:水牛ASAH1基因的编码区全长993 bp,共编码330个氨基酸.多重序列比较分析显示水牛ASAH1核苷酸序列与牛、山羊、绵羊、猪、马、人和非洲象相应序列的相似性分别为99％、97％、96％、90％、90％、89％和87％,结合系统进化树分析结果,ASAH1基因在不同物种以及进化的过程中具有高度保守性.对ASAH1蛋白质的分析表明:该蛋白呈弱酸性,无信号肽,细胞亚定位于溶酶体,存在NAAA-beta和Ntn_ AC_NAAA结构域.成功构建水牛ASAH1基因真核表达载体,转染293T和CHO细胞系后,均能够正确形成ASAH1-EGFP融合蛋白,产生绿色荧光信号.我们的结果为今后阐明ASAH1基因在水牛水牛卵泡发生和胚胎发生过程中的作用及分子机制奠定了理论基础.

关键词：水牛、ASAH1、克隆分析、载体构建

所属期刊栏目：47

分类号：S823.8+3(家畜)

资助基金：农业部转基因重点项目2014ZX0801012B;2014年国际先进技术引进与合作研究开发桂科合14123001-5;2014年区畜牧局科技推广应用桂渔牧科201452032

在线出版日期：2015-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：56-61