MEF2C基因RNA干扰质粒的构建及干扰效率测定

摘要：

为了构建猪MEF2C基因的RNA干扰重组质粒,并筛选出最佳干扰效率的序列,本试验采用RNAi技术,设计并合成了3条针对猪MEF2C基因的RNA干扰序列,构建了RNA干扰重组质粒(命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3),将其转染到小鼠C2C12细胞,并用实时定量PCR检测细胞中MEF2C基因mRNA的表达,Western blot测定细胞中MEF2C基因蛋白的表达.结果表明:重组质粒经PCR扩增后显示产物大小与预期一致,产物经双酶切及测序鉴定该序列与NCBI提供的序列一致.重组质粒转染C2C12细胞后,MEF2C基因mRNA表达受到不同程度抑制,抑制率分别为(33.67±2.51)％、(21.00±3.60)％、(71.67±4.04)％.Western blot结果表明MEF2C基因蛋白表达受到不同程度抑制,抑制率分别为(47.33±0.05)％、(38.25±0.16)％、(67.27±0.12)％.本试验成功构建猪MEF2C基因干扰重组质粒,最终确定干扰质粒(siRNA-3)具有最佳干扰效果,证实MEF2C基因的干扰质粒能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为探讨该基因与肌肉肉质性状的关系提供理论基础.

关键词：MEF2C、C2C12、重组质粒、转染

所属期刊栏目：47

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金31272415/C170102;辽宁医学院奥鸿博泽项目AH2014007

在线出版日期：2016-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：31-35