TRAIL和HN基因融合表达重组腺病毒的构建及其对DT40细胞的抑瘤作用
分析携TRAIL和HN基因的重组腺病毒在DT40细胞中的表达规律及杀伤肿瘤细胞的生物学效应.通过RT-PCR分别从鸡外周血淋巴细胞和新城疫病毒(NDV) LaSota株中扩增出TRAIL和HN基因.通过定点突变和重叠延伸拼接法实现TRAIL和HN基因的2A连接,将获得的目的基因克隆到pShuttle-CMV穿梭载体中,与pAdeasy-1载体在BJ5183细菌内同源重组,构建了包含目的基因的重组腺病毒质粒pAd-TRAIL和pAd-TRAIL-2A-HN,将质粒线性化后转染AD293细胞,包装后的重组腺病毒,经RT-PCR检测、荧光显微镜观察和病毒滴度测定后,将获得的重组腺病毒体外转染禽淋巴白血病DT40细胞,通过RT-PCR和Western blotting检测重组腺病毒的感染性和外源基因的表达情况,采用流式细胞仪检测重组腺病毒对DT40细胞生长的影响以及Ad-TRAIL和Ad-TRAIL-2A-HN对DT40细胞的凋亡作用.PacⅠ酶切证实同源重组成功；RT-PCR、荧光显微镜检测证实重组腺病毒质粒成功导入AD293细胞中H具有良好的感染性,滴度为1.9×1010 PFU/mL; Western blot检测结果显示,TRAIL-linker-HN基因能够在DT40细胞中稳定表达并对DT40细胞产生细胞毒作用,且诱导细胞的凋亡率为29.52％,表明TRAIL-linker-HN具有双基因抑瘤的协同效应.
TRAIL-2A-HN融合基因、重组腺病毒、禽淋巴白血病细胞、抑瘤作用
44
S895.79(养蜂、益虫饲养)
国家自然科学基金;天津市高等学校科技发展基金;天津市自然科学基金重点项目
2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
1-6
