禽流感病毒M2e特异性多肽ELISA检测方法的建立
本研究人工合成禽流感病毒H5Nl亚型M2蛋白的膜外区(M2e),并偶联至半抗原载体血蓝蛋白(KLH),免疫SPF鸡,共免疫3次,每次间隔两周.所获得的阴阳性血清用于ELISA方法的建立,通过方阵滴定确定了人工合成的23肽包被96孔ELISA板的最佳浓度为5μg/mL;1%BSA为封闭液,37℃封闭3 h;被检测血清的最佳稀释度为1:400,一抗反应时间为37℃,45 min;二抗反应时间为37℃30 min;选用TMB为底物,显色15 min,用2 mol/L H2SO4为终止液为检测血清中抗M2e抗体滴度奠定基础.根据建立的ELISA方法,检测3次免疫2周后的SPF鸡血清中抗M2e抗体,血清开始1:100倍稀释之后做倍比稀释,测得平均滴度分别为1:13 500和1:20 500.
禽流感病毒、M2e、多肽、间接ELISA
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S855.3(动物医学(兽医学))
江苏省高科技计划资助项目BG2002006324;江苏省农业科学院博士后基金项目08813110630
2010-05-04(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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