禽致病性大肠杆菌IMT5155株毒力相关基因片段E9的表达及生物学特性分析

摘要：

根据禽致病性大肠杆菌IMT5155毒力相关基因E9的序列,设计并合成了1对特异性引物,以IMT5155菌株的基因组DNA为模板扩增了E9基因所在ORF的部分序列.将PCR产物进行了T/A克隆,转化大肠杆菌,鉴定成功获得目的片段后,将其定向亚克隆到pET-28a(+)载体中,构建了原核表达质粒pET-28a-E9,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经1 mmol/L异丙基-β-D-硫半乳糖苷(IPTG)诱导和SDS-PAGE分析,出现了与预期目的蛋白一致的外源蛋白带(32.2 ku).Western-blot分析表明,该融合蛋白具有免疫反应性.对重组蛋白进行纯化后免疫动物进行抗体效价测定,进一步分析重组蛋白的相关生物学功能,分别进行了细胞毒性试验、动物试验、细胞黏附与黏附影响试验.结果表明,该蛋白没有细胞毒性,对小鼠亦无毒性,有一定的黏附作用.

关键词：禽致病性大肠杆菌、毒力相关基因、E9、融合表达、生物学功能

所属期刊栏目：42

分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：中德农业科技合作项目2008

在线出版日期：2010-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：20-24