大型艾美耳球虫重组蛋白GAPDH对兔的免疫保护效果评价

摘要：

本研究旨在评价大型艾美耳球虫重组蛋白(rEm-GAPDH)对兔的免疫保护效果,为大型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础.根据转录组数据筛选出Em-GAPDH基因,进行原核表达与蛋白纯化;将50只45日龄无球虫感染幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEm-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS含100 μg pET-32a空载蛋白和1 mg Quil-A、1 mL PBS含1 mg Quil-A、1mL 100 μg rEm-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫,二免14 d后每只兔经口感染1×105 个大型艾美耳球虫孢子化卵囊,观察各组兔临床症状,每周固定时间采血和称重,感染14 d后宰杀剖检并测定和统计各组兔的卵囊排出量、相对增重、特异性IgG抗体和细胞因子等.结果成功表达了重组蛋白rEm-GAPDH,大小在59 ku左右,且大部分表达在包涵体.免疫保护试验表明:感染后不免疫攻虫组出现症状,而免疫组症状不明显.rEm-GAPDH免疫组的卵囊减少率达57.16%,相对增重率显著大于不免疫攻虫组(P<0.05),ACI值为144.96.特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与对照组存在显著差异(P<0.05).大型艾美耳球虫重组蛋白rEm-GAPDH可以减少增重损失和卵囊排出,能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答,具有一定免疫保护作用,可以作为大型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原.

关键词：兔、大型艾美耳球虫、三磷酸甘油醛脱氢酶、重组蛋白、免疫保护

所属期刊栏目：54

分类号：S852.4;S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省科技计划项目;国家重点研发计划

在线出版日期：2023-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：4338-4349