非洲猪瘟病毒P30蛋白的表达及抗体液相芯片检测方法的建立

摘要：

本研究旨在为建立高效、快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的抗体液相芯片检测方法.首先构建pET-28a-p30表达载体,利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统表达ASFV重组P30蛋白,然后将重组P30蛋白与羧基化的荧光微球偶联,建立ASFV P30抗体液相芯片检测方法.经鉴定,重组质粒成功转入大肠杆菌BL21感受态细胞,并以包涵体形式表达,Western blot结果显示重组P30蛋白可以与AS-FV阳性血清产生特异性反应,证明其具有良好的反应原性.建立的ASFV抗体液相芯片检测方法检测中值荧光强度(median fluorescent intensity,MFI)阈值为1 575.7,最佳结合蛋白浓度为每1.25×106 个微球6 μg,最佳血清稀释度为1∶600,最佳二抗浓度为1 μg·mL-1,该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性.用建立的方法和商品化ELISA试剂盒同时对92份临床采集的猪血清样本进行检测,结果显示二者符合率为92.39%.本研究成功表达重组P30蛋白,并建立了ASFV P30抗体液相芯片检测方法,为ASFV感染早期的血清学检测提供了新的方法,也为多种病原体的抗体检测奠定了基础.

关键词：非洲猪瘟病毒、P30蛋白、原核表达、液相芯片技术、抗体检测

所属期刊栏目：54

分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省重点研发计划;山东省农业重大应用技术创新项目

在线出版日期：2023-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：4300-4310