苏淮猪背最长肌FAPs细胞体外成脂能力及其基因表达模式的研究

摘要：

旨在体外获得纯度较高的苏淮猪背最长肌纤维/脂肪形成祖细胞(fibro/adipogenic progenitors,FAPs),并评价其在体外传代过程中成脂能力与基因表达模式的变化.本研究取1日龄苏淮公猪背最长肌,消化获得悬浮混合细胞,利用抗表面特异抗原血小板衍生生长因子受体α(PDGFRα)抗体通过免疫荧光评价4种不同差速贴壁时间分离的FAPs细胞的纯度,确定最佳差速贴壁时间.然后比较不同代数FAPs细胞(P1、P3和P5代)的体外成脂分化能力,并利用RNA-Seq比较不同代数FAPs细胞的基因表达模式,鉴别差异表达基因、KEGG通路与GO功能分类.研究结果表明,差速贴壁30 min分离的苏淮猪背最长肌FAPs细胞的纯度较高.对不同代数FAPs成脂能力评价发现,随着体外传代次数的增加,其成脂能力显著下降.利用RNA-Seq发现P3和P5代FAPs细胞的基因表达模式相近,P3和P5代分别与P1代FAPs细胞相比,鉴定到2 336个共有的差异表达基因,其中差异上调基因1 102个,差异下调基因1 234个,KEGG和GO分析表明共有的差异上调基因主要富集在PI3K-AKT-FoxO、PI3K-AKT-HIF-1和cGMP-PKG等通路,共有的差异下调基因主要富集在DNA复制和修复等通路,其中可抑制细胞增殖与成脂分化的IRS1、FOXO3、CCNG2、EGFR、FGF1基因表达上调,可促进细胞增殖的CSF1R和SIPA1L2基因表达下调.P3与P5相比发现,差异上调基因主要富集在NOD-like、MAPK和非典型 Wnt信号等通路;差异下调基因主要富集在VEGF、PPAR、Notch以及IL-17等信号通路,其中可抑制细胞成脂分化的TNFAIP3、AREG、FGF1、FGF9基因表达上调,可促进成脂分化的PPARγ、C/EBPα、LCN2基因下调.本研究结果表明,差速贴壁30 min能够得到纯度较高的猪FAPs细胞,FAPs细胞在体外培养过程中成脂分化能力不断下降,其基因表达模式发生了较大变化,主要表现为可促进细胞增殖和成脂分化的信号通路及其相关基因表达水平下降,本研究结果可为开发能维持猪FAPs细胞体外成脂能力的培养基配方提供参考.

关键词：猪、FAPs细胞、体外、成脂能力、基因表达

所属期刊栏目：54

分类号：S828.2(家畜)

资助基金：国家自然科学基金;南京农业大学高层次引进人才项目

在线出版日期：2023-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共17页

页码：4126-4142