猫角膜缘干细胞不同采集、分离与培养鉴定方法的对比研究

摘要：

本研究旨在对比不同的分离与培养方法体外培养猫角膜缘干细胞(feline limbal stem cells,FLSCs)的效果,建立使FLSCs持续稳定增殖、结构及功能正常的最佳分离与培养体系.在手术显微镜下活体采集猫角膜缘组织,分别使用组织贴壁法(T法)、混合酶消化法(N法)、混合酶消化法联合组织贴壁法(NT法)分离FLSCs,鉴定LSCs标志蛋白ABCG2,以筛选最适分离方法.用BC培养基、DLM培养基和SCM培养基进行细胞培养,连续7 d细胞计数、观察细胞形态,选取LSCs的阳性标志物p63、波形蛋白和上皮分化标记物CK3、CK12定性分析第3、4、5代培养细胞.结果显示:3种方法分离的细胞中,ABCG2均呈阳性表达,NT法表达最强,表明3种方法均可分离FLSCs,NT法消化分离效果最好.3种培养基均可培养FLSCs,细胞形态无差异,细胞在DLM组中增殖速度最快,更快到达细胞生长峰值,与其他两组比,差异显著(P＜0.05).FLSCs生长曲线图呈典型"S"型,前72 h为迟缓期,72～216 h为对数生长期,216～264 h则基本处于平稳期,从264 h开始进入衰亡期.FLSCs群体倍增时间为38.9 h,平均最大增殖浓度为5.66× 105 cells·mL-1.第3、4和5代FLSCs中波形蛋白、p63均呈强阳性表达,CK3和CK12不表达.使用NT法分离FLSCs,并在DLM中进行培养,可建立稳定增殖的FLSCs体外培养体系.

关键词：猫、角膜缘干细胞、分离方法、培养体系

所属期刊栏目：54

分类号：S857.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;西南大学实验技术研究项目;深圳市瑞鹏公益基金

在线出版日期：2023-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：3091-3101