牛支原体0580基因C端截短体的原核表达及生物学功能初步分析

摘要：

旨在初步分析牛支原体(Mycoplasma bovis)PG45菌株0580基因的生物学功能.前期测试发现牛支原体PG45菌株、08M菌株、07801菌株都有溶解鼠红细胞的现象,根据NCBI中对PG45菌株的基因注释,筛选到1个假定与溶血素相关的基因MBOVPG45_0580.该基因编码的蛋白经预测具有4个跨膜区,全长表达困难,故构建了不含跨膜区的C端截短体原核表达载体Pcold Ⅲ-0580-C,进行诱导表达以及纯化,并在小鼠中制备0580-C端重组蛋白的多克隆抗体,对0580-C重组蛋白溶红细胞能力、多克隆抗体效价及特异性、是否影响菌株黏附细胞的能力进行了探究.PG45菌株中假定的与溶血素相关的蛋白0580在牛支原体中的相似性高达100％,去除4个跨膜区的重组蛋白0580-C能在大肠杆菌中表达,相对分子质量约为37 ku;鼠红细胞溶血试验发现0580-C重组蛋白没有溶血活性,但黏附及黏附阻断试验发现该蛋白有助于提高牛支原体黏附EBL细胞的效率,0580-C蛋白鼠源多抗能有效阻断牛支原体对EBL细胞的黏附.制备的0580-C蛋白鼠源多克隆抗体效价达211,且能识别到3株牛支原体菌株(PG45、08M、07801)天然表达的0580蛋白,表明制备的0580-C蛋白鼠源多克隆抗体特异性较好.牛支原体中假定的与溶血素相关蛋白0580可能是一种新的黏附相关分子,为解析牛支原体MBOVPG45_0580基因的生物学功能以及牛支原体致病机制提供了新的见解.

关键词：牛支原体、原核表达、黏附作用、0580-C重组蛋白

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分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：甘肃省科技重大专项;中国农业科学院创新工程所级重点项目;中国农业科学院兰州兽医研究所基本科研业务费;甘肃省重点人才项目

在线出版日期：2023-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：2991-3001