斯氏艾美耳球虫3-磷酸甘油醛脱氢酶重组蛋白对兔的免疫保护效果评价

摘要：

旨在评价斯氏艾美耳球虫重组蛋白Es-GAPDH对兔的免疫保护效果,为兔斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的研制奠定基础.利用相对荧光定量PCR分析Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫不同发育时期的转录水平,并对Es-GAPDH进行原核表达与蛋白纯化;然后将42只45日龄无球虫幼兔随机分为5组(空白对照组、不免疫攻虫组、Trx-His-S tag攻虫对照组、Quil-A saponin攻虫对照组和rEs-GAPDH免疫组),分别经颈部皮下注射1 mL PBS、1 mL PBS、1 mL PBS 含 100 μg pET-32a 空载蛋白含 1 mg Quil-A、1 mL PBS 含 1 mg Quil-A、1 mL 100 μg rEs-GAPDH含1 mg Quil-A,首免14 d后同等剂量加强免疫.二免14 d后除空白对照组外,其余各组实验兔经口感染1×104个斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊,攻虫后观察各组临床表现,每周定时采血、称重,感染21 d后剖检观察肝组织病理变化,并测定和统计每组的相对增重、料肉比、肝指数、卵囊排出量、生化指标、特异性IgG抗体以及细胞因子等.结果发现,Es-GAPDH在斯氏艾美耳球虫各个发育阶段均有转录,且转录水平存在差异,在孢子化卵囊阶段转录水平最高.免疫保护试验表明:感染后不免疫攻虫组出现兔肝球虫病典型症状,而rEs-GAPDH免疫组症状不明显.rEs-GAPDH免疫组的卵囊减少率达87.09％,相对增重率显著大于三个攻虫对照组(P＜0.05),特异性IgG抗体水平、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β)水平均与不免疫攻虫组存在显著差异(P＜0.05),组织病理切片也显示,免疫组相较不免疫攻虫组肝组织被破坏程度低,虫体数量较少.综上,斯氏艾美耳球虫重组蛋白rEs-GAPDH可减少增重损失和卵囊排出,能引发宿主体内的细胞免疫和体液免疫应答,具有一定免疫保护作用,可作为斯氏艾美耳球虫重组亚单位疫苗的候选抗原.

关键词：兔、斯氏艾美耳球虫、三磷酸甘油醛脱氢酶、重组蛋白、免疫保护

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分类号：S852.4;S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2017YFD0501200

在线出版日期：2023-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共15页

页码：2581-2595