siRNA-757干扰旋毛虫Ts-ODC基因对其抗酸能力的影响

摘要：

旨在探究旋毛虫肌幼虫体内是否存在鸟氨酸依赖型抗酸系统,本研究根据GenBank中Ts-ODC全序列基因组设计三条特异性siRNA分子,采用脂质体浸染转染的方法将其分别转染至旋毛虫肌幼虫体内,使用qPCR、Western blot和间接免疫荧光试验,筛选最佳干扰siRNA分子及最佳干扰条件;并在pH 1.5、2.5、4.5和6.6的条件下将肌幼虫分别培养0.5、1和2 h,从肌幼虫Ts-ODC基因转录水平、酶活性及存活率等方面分析Ts-ODC基因干扰对旋毛虫肌幼虫抗酸能力的影响;将Ts-ODC基因被干扰的旋毛虫肌幼虫感染小鼠,在7和42 d时分别收集成虫和肌幼虫,分别计算其减虫率;将子一代肌幼虫在pH 2.5的酸性条件下培养2 h,计算其存活率,对Ts-ODC基因干扰的遗传性进行分析.结果显示,Ts-ODC siRNA-757为最佳干扰分子,转染12 h、浓度为2 μmol·L-1培养3 d时为最佳干扰条件;各组pH 2.5培养2 h时Ts-ODC基因转录水平最高,pH 1.5培养2 h时虫体的存活率明显低于其他培养条件(P＜0.01),pH 4.5培养0.5 h时虫体体内酶活性最高;转染Ts-ODC siRNA-757的肌幼虫接种小鼠后,7 d时成虫和42 d时肌幼虫的减虫率分别为58.95％和65.91％;其子一代肌幼虫在pH 2.5的培养液内培养2 h时其存活率为49％.综上表明,旋毛虫肌幼虫体内具有鸟氨酸依赖型抗酸系统,本研究首次通过siR-NA 技术干扰旋毛虫肌幼虫Ts-ODC基因,且证实干扰Ts-ODC基因可降低肌幼虫抗酸能力,为后期旋毛虫病的防治提供新思路.

关键词：旋毛虫、鸟氨酸脱羧酶、RNA干扰、抗酸系统

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分类号：S852.731(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;家畜疫病病原生物学国家重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所开放课题;国家寄生虫资源库

在线出版日期：2023-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：2114-2125