检测鸡毒支原体抗体的间接ELISA方法和HI试验方法的建立及初步应用

摘要：

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案.以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1∶500血清稀释度处S/P值的回归方程1g(抗体滴度)=1.257×lg(1∶500 处 S/P 值)+3.709,R2=0.917 6,S/P 临界值为 0.32,临界滴度是 1 200.经验证,rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性,最低能检出1∶2 000稀释的阳性血清.选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法.使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测,IDEXX-MG方法作为对照,借助RT-qPCR方法监测MG感染情况.结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致;rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53％.上述结果显示,本研究建立的rVlhA-ELISA方法和HI试验具有较好的临床应用价值,可以初步应用于MG感染的临床大规模、快速筛查并对结果进行复核.

关键词：鸡毒支原体、VlhA蛋白、抗体检测、间接ELISA

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分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：现代农业产业技术体系;国家重点研发计划;国家重点实验室开放基金;江苏高校优势学科建设工程资助项目

在线出版日期：2023-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：2062-2072