非洲猪瘟病毒RNA聚合酶亚基D205R基因生物信息学分析及多克隆抗体制备

摘要：

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)pD205R蛋白参与病毒基因的转录,属于ASFV RNA聚合酶,且与真核生物RNA聚合酶Ⅱ RPB5亚基相似,为深入了解pD205R结构,功能及病毒与宿主之间的作用机制.利用DNAStar、MEGA7.0对GenBank中公布的不同毒株的ASFVD205R基因序列进行分析,利用ExPASy、GOR4、AlphaFold软件对该蛋白的理化性质及结构预测进行分析,并对其原核表达和制备抗pD205R蛋白多克隆抗体.结果显示:在不同基因型间D205R基因高度保守;利用ExPASy在线软件预测pD205R蛋白理化性质其分子式为C1088H1712N278O295S8,属亲水性蛋白,稳定性差;二级结构及三级结构预测显示,α螺旋是其主要结构形式,占比为35.12％;同时以ASFV-CN/SC/2019毒株基因组为模板,构建原核表达质粒pET-28a-D205R并转入Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导重组蛋白成功表达,大小为23.3 ku.获得的蛋白经镍柱亲和层析纯化,Western blot鉴定可与ASFV阳性血清发生特异性反应.免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体效价达到1 ∶51 200,Western blot和IFA结果显示制备的多克隆抗体够特异性的识别ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞中表达的天然pD205R蛋白,为进一步研究D205R基因的功能及其在宿主与病毒互作中的作用奠定了基础.

关键词：非洲猪瘟病毒、pD205R蛋白、原核表达、多克隆抗体

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分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家重点研发计划;甘肃省科技重大专项;甘肃省科技重大专项;农业科技创新工程;农业科技创新工程;甘肃省基础研究创新群体项目;甘肃省自然科学基金;渭南市高层次人才特支计划项目

在线出版日期：2023-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2042-2049