山羊APOA4基因抑制肌内脂肪细胞分化

摘要：

旨在明确山羊脂蛋白A-Ⅳ(apolipoprotein A-Ⅳ,APOA4)对肌内脂肪细胞分化的调控作用.本试验所用动物为1周岁生理状态良好,舍饲的简州大耳羊公羊(n=5).试验利用RT-PCR技术克隆山羊APOA4基因序列,通过生物信息学分析方法对克隆得到的序列进行分析,并获得序列特征;利用qPCR技术构建山羊APOA4的组织与细胞时序表达谱;通过构建山羊APOA4基因过表达载体,本试验分为过表达组(pEGFP-N1-APOA4)与阴性对照组(pEGFP-N1),每组设置3个重复,每个重复的样本量为2个.转染pEGFP-N1-APOA4过表达载体和pEGFP-N1至山羊肌内前体脂肪细胞并诱导分化,通过油红O染色、Bodipy染色、DAPI染色、吸光度(OD490 nm)测定及qPCR等方法确定过表达山羊APOA4基因对肌内脂肪细胞分化及脂肪形成标志物的影响.结果表明:1)试验克隆得到山羊APOA4基因序列1 467 bp,其中CDS区1 143 bp,编码380个AA;2)生物信息学分析推测得到山羊APOA4为带负电且属于酸性不稳定疏水蛋白;3)山羊APOA4在山羊各组织广泛表达,在肝中表达量最高,极显著高于其他组织(P＜0.01).APOA4在诱导分化48 h的肌内脂肪细胞中表达最高;4)过表达山羊APOA4基因后与对照组相比较,发现肌内脂肪细胞脂滴积聚减少,脂肪分化标志基因C/EBPα、PPARγ表达极显著下调(P＜0.01),SREBP1、C/EBPβ表达水平显著下调(P＜0.05).脂代谢标志基因AP2、LPL显著下调(P＜0.05).综合形态学染色和分子生物学结果,山羊APOA4基因可能通过抑制分化标志基因C/EBPα、PPARγ、SREBP1、C/EBPβ以及脂代谢标志基因AP2、LPL的表达,进而抑制肌内脂肪细胞的分化和脂滴积聚,提示过表达山羊APOA4基因抑制肌内脂肪细胞分化.

关键词：山羊、APOA4、肌内脂肪细胞、过表达、细胞分化

所属期刊栏目：54

分类号：S827.2(家畜)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;四川省应用基础研究计划重点项目;西南民族大学研究生创新型科研项目

在线出版日期：2023-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：1927-1938