PDCD4对奶山羊乳腺上皮细胞的凋亡及β-酪蛋白和TG合成的影响

摘要：

旨在探究奶山羊程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)对乳腺上皮细胞(goat mammary epithelial cells,GMECs)凋亡及乳成分的调控作用.本研究通过双荧光素酶报告试验验证miR-21-5p与PDCD4的靶向关系,通过RT-qPCR、Western blot试验检测miR-21-5p对PDCD4的调控作用;将PDCD4干扰小RNA(si-PDCD4)与PDCD4过表达载体(pc3.1-PDCD4)转染进GMECs以探究PDCD4对GMECs的影响,通过EdU、CCK-8试验检测转染后对GMECs增殖的影响,利用流式细胞术检测转染后对GMECs凋亡的影响;利用ELISA试剂盒检测转染后GMECs中β-酪蛋白和甘油三酯(TG)的分泌情况;最后通过Western blot试验检测转染后GMECs中PI3K、mTOR、S6K、ERK、Bcl-2、Bax等蛋白的表达.双荧光素酶报告试验结果表明,PDCD4与miR-21-5p靶向结合;EdU、CCK-8及流式细胞术试验结果表明,过表达PDCD4后GMECs活力显著降低(P＜0.01),即PDCD4抑制GMECs增殖并促进GMECs凋亡(P＜0.01),干扰PDCD4的表达后GMECs活力显著提高(P＜0.01),GMECs的凋亡水平显著降低(P＜0.01);ELISA试验结果表明,过表达PDCD4后GMECs中β-酪蛋白和TG的分泌量显著降低(P＜0.01),降低PDCD4的表达后GMECs中β-酪蛋白和TG的分泌量显著上升(P＜0.01);Western blot试验结果表明,与对照组相比,过表达PDCD4后磷酸化的PI3K、mTOR、S6K、ERK蛋白表达显著降低(P＜0.05),Bax蛋白表达被显著上调(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达水平被显著下调(P＜0.01);降低PDCD4的表达后,PI3K、mTOR、S6K、ERK的磷酸化蛋白表达显著提高(P＜0.05),Bax的表达则显著下降(P＜0.05),同时显著上调了 Bcl-2的表达(P＜0.05).本研究结果表明,PDCD4通过激活ERK/Bcl-2/Bax信号通路促进奶山羊乳腺上皮细胞的凋亡,并通过抑制PI3K/mTOR/S6K信号通路降低奶山羊乳腺上皮细胞中β-酪蛋白和TG的分泌,miR-21-5p在GMECs中与PDCD4靶向结合并调控其表达.

关键词：PDCD4、miR-21-5p、奶山羊、凋亡、β-酪蛋白、TG

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分类号：S827.2(家畜)

资助基金：陕西省重点研发计划;陕西省重点研发计划;杨凌职业技术学院科学研究基金;杨凌职业技术学院自然科学研究基金;优质肉羊种质资源的引进、评价和利用

在线出版日期：2023-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：1429-1440