抑制PERK对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞自噬的影响

摘要：

旨在研究PERK在脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞自噬中的作用.首先,试验设对照组(CON)和LPS组(LPS,4 μg·mL-1),研究LPS对奶牛乳腺上皮细胞内质网应激和自噬的影响;随后用不同浓度的PERK抑制剂GSK2606414(GSK)预处理细胞,通过测定PERK、ATF4、eIF-2α 和 CHOP的mRNA表达,筛选出GSK的最佳抑制浓度;最后将奶牛乳腺上皮细胞分为对照组(CON)、LPS组(LPS)、GSK+LPS组(GLPS)和GSK组4组,研究抑制PERK对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞自噬的影响.采用RT-qPCR和Western blot分析内质网应激、自噬相关基因和蛋白的表达,通过免疫荧光检测GRP78和p62的荧光强度.结果表明:1)与对照组相比,LPS组的PERK、IRE1α、ATF6、GRP78和CHOP的mRNA和蛋白表达均显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)升高.LPS还可以显著升高LC3、ATG5、ATG14和Beclin1的mRNA和蛋白表达(P＜0.01),并且显著降低p62的mRNA和蛋白表达(P＜0.01).此外,LPS可降低p62的荧光强度、升高GRP78的荧光亮度以及增加溶酶体的形成;2)与LPS组相比,GSK预处理可显著降低PERK、ATF4、eIF-2α、CHOP蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),并且还可以显著降低LC3、ATG14、ATG5、Beclin1以及升高p62的mRNA和蛋白表达(P＜0.01或P＜0.05).免疫荧光试验结果进一步表明,GSK预处理可增加p62的荧光强度.因此,在本研究背景下,LPS可诱导奶牛乳腺上皮细胞发生内质网应激和自噬,并且抑制PERK/eIF-2α/ATF4信号通路可缓解LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞自噬.

关键词：奶牛乳腺上皮细胞、LPS、自噬、PERK

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分类号：S857.26(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;宁夏回族自治区自然科学基金重点项目;宁夏回族自治区重点研发计划项目;江苏省高等学校重点学科发展计划

在线出版日期：2023-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：351-360