非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

摘要：

旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白的特异性单克隆抗体.本研究利用大肠杆菌表达系统表达p54蛋白,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合.利用纯化的p54蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA方法筛选获得阳性杂交瘤细胞.经4次亚克隆后,取杂交瘤细胞上清进行单克隆抗体亚型鉴定,利用体内诱生法制备单克隆抗体并进行纯化.间接ELISA方法检测单克隆抗体的效价,利用交叉反应性试验、间接免疫荧光试验和蛋白印迹对所获单克隆抗体的特异性进行鉴定.根据预测的p54蛋白二级结构,采用逐步截短法分析鉴定单克隆抗体识别的抗原表位区域,并在p54的三级结构中进行标注.结果显示:成功筛选了 6株分泌p54单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为 28G12-1、31G7-1、31G7-2、35F10-1、35F10-2、38D3-1.其中 28G12-1、31G7-1、31G7-2重链为IgG2a型,35F10-1、35F10-2、38D3-1重链为IgG1型;轻链均为κ链.单克隆抗体的最低效价为1:25 600,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流行性腹泻病毒、猪细小病毒、猪急性腹泻综合征冠状病毒、猪圆环病毒2型不发生交叉反应,特异性强,所获抗体均识别p54蛋白C端127-146 aa肽段.本研究成功获得了 ASFV p54蛋白和p54单克隆抗体,并鉴定了 6株单克隆抗体的抗原表位,为p54蛋白功能研究和ASFV新型表位疫苗研究奠定了基础.

关键词：非洲猪瘟病毒、p54蛋白、原核表达、单克隆抗体、间接ELISA、抗原表位

所属期刊栏目：54

分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;河南省教学改革研究项目

在线出版日期：2023-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：281-292