西门塔尔牛表皮干细胞的分离培养与生物学特性研究

摘要：

旨在建立西门塔尔牛表皮干细胞(epidermal stem cell,EpSCs)分离培养体系,探究其生物学特性,为西门塔尔牛种质资源保存提供新方法,为干细胞治疗研究提供种子细胞.采用3～4月龄西门塔尔牛背部表皮,通过酶消化法和组织贴壁法两种方法分离培养西门塔尔牛EpSCs,绘制EpSCs生长曲线探讨其增殖能力.通过免疫荧光鉴定EpSCs表面标记物(ITG β1、P63和CD71),通过RT-PCR分析EpSCs特异性基因(ITG β1、KRT19和ITGα6)表达情况.通过体外诱导EpSCs分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞检测其分化潜能.结果显示,组织块贴壁法获得的EpSCs纯度较低,酶消法获得的EpSCs纯度较高,细胞传代至P28代时开始逐渐老化.EpSCs细胞生长曲线呈"S"型.免疫荧光结果显示EpSCs表面特异性标记物ITG β1、P63和CD71呈阳性表达,RT-PCR结果显示EpSCs高度表达ITGβ1、KRT19和ITG α6,不表达CD31基因.EpSCs诱导分化脂肪细胞时,产生可被油红O着色的脂滴,经鉴定细胞阳性表达脂肪细胞PPAR-y和LPL特异性基因.EpSCs诱导分化成骨细胞时,形成可被茜素红染色呈橙红色的钙结节,且细胞阳性表达Collagen Ⅰ和RUNX2基因.EpSCs诱导分化软骨细胞时,透明状软骨基质经阿利新蓝染色呈蓝色,且细胞阳性表达软骨细胞特异性基因BGN和Collagen Ⅱ.上述结果表明,成功从西门塔尔牛胎牛表皮中分离得到生长状态良好的西门塔尔牛EpSCs,且具有向脂肪、成骨和软骨细胞等中胚层细胞分化的潜能,建立了西门塔尔牛EpSCs体外分离培养体系.

关键词：西门塔尔牛、表皮干细胞、分离培养、诱导分化

所属期刊栏目：54

分类号：S823.2(家畜)

资助基金：国家农业科技创新计划项目;黑龙江省教改项目;牡丹江师范学院研究生创新项目

在线出版日期：2023-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：168-177