基于非洲猪瘟病毒p30与p54蛋白表位串联多肽的间接ELISA抗体检测方法的建立

摘要：

旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的间接ELISA方法.本研究以两株纯化的ASFV p30与p54蛋白单克隆抗体(mAbs)为靶分子,利用噬菌体展示十二肽库进行四轮生物淘选,筛选多肽表位,以氨基酸GGG为接头设计合成表位串联多肽作为包被抗原,通过棋盘滴定法确定间接ELISA的最佳反应条件,利用不同类型血清样本对建立的方法进行特异性分析、敏感度分析、稳定性分析及符合性评价.噬菌体淘选试验结果表明146PAEPYTT152为本实验室保存的mAb所识别的p54蛋白抗原表位核心序列.ELISA条件优化试验结果显示,以鸡卵白蛋白(OVA)作为N端偶联物的表位串联多肽抗原具有较低的非特异性血清反应背景,当多肽以碳酸盐缓冲液包被(2μg·mL-1),血清以封闭液(1％明胶溶液)稀释100倍,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体以0.05％PBST溶液稀释5 000倍时,反应效果最佳;以上述优化后的条件确定了血清抗体阳性临界值为0.339.方法评价试验结果显示,该方法与经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)及猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗体阳性血清均无交叉反应,能检测低至1 600倍稀释的ASFV阳性血清,具有较好的重复性.用该方法与商品化的ASFV抗体检测试剂盒同时检测320份猪血清样本,两种方法的相对特异性和相对敏感性分别为97.6％与97.3％,总体符合率达97.5％(312/320).综上表明,本研究建立的多肽间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性及重复性,具有发展为临床诊断试剂盒的潜在应用价值.

关键词：非洲猪瘟病毒、p30蛋白、p54蛋白、生物淘选、表位串联多肽、间接ELISA

所属期刊栏目：53

分类号：S855.3;S852.659(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;广州市重点领域研发计划;现代农业产业技术体系

在线出版日期：2023-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：4325-4336