广东地方品种鸡ALV-K分子流行病学及gag基因12 bp缺失对病毒体外复制能力影响的研究

摘要：

为了解目前广东地方品种鸡K亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-K)的分子特征,于2020-2021年,从广东7家(A～G)正在进行外源性ALV净化的、外观健康的规模化种禽场核心群采集抗凝血样品共8 042份.通过血浆接种DF-1细胞、ELISA检测p27抗原,共检出357份阳性,并对ELISA结果S/P值0.2～0.6的150份阳性样品进行PCR鉴定和env基因测序,共分离到32株ALV-K,进一步选取16株进行全基因组扩增及测序分析.结果显示,这16株ALV-K全长为7 481～7 496 bp,基因组符合5'-LTR-UTR-gag-pol-env-UTR-LTR-3'典型的反转录病毒结构,不含已知致癌基因;其gp85基因与ALV-K参考株位于同一进化分支上且相似性最高(＞94.0％);其pol、gp37基因均比较保守,与ALV各亚群相似性均较高(＞94.0％);其LTR与内源性ALV及大多数ALV-K参考株相似性最高(91.4％～99.5％),且LTR U3区与内源性ALV LTR有相同的转录调控元件;此外,观察到31.3％(5/16)的分离株在gag基因373-384位核苷酸存在12 bp的缺失,进一步以缺失株GD20 JM10为亲本,通过PCR分段扩增和同源重组的方法分别构建了缺失株(rGD20 JM10)和回补株(rGD20 JM10 A12)的cDNA克隆,将其转染DF-1细胞,ELISA和IFA结果表明,病毒拯救成功;体外复制动力学结果显示,两者差异不显著(P＞0.05).本研究所调查的广东7个种禽场的ALV-K流行株均携带内源性LTR,且分子特征较为稳定,故采用更敏感的检测技术在开展ALV净化时尤为重要,此外,gag基因373-384位核苷酸的规律性缺失对病毒的体外复制能力无显著影响.

关键词：K亚群禽白血病病毒、地方品种鸡、分子流行病学、gag基因、感染性克隆

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分类号：S852.659.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：广东省重点领域研发计划项目;广东省家禽产业技术体系;国家肉鸡产业技术体系项目

在线出版日期：2022-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：3956-3966