PK-15细胞的ISG15基因敲除促进PRV的复制

摘要：

本试验旨在研究干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响.通过CRISPR/Cas9技术构建猪ISG15基因敲除猪肾上皮(PK-15)细胞系,利用CCK-8试剂盒检测PK-15敲除ISG15基因对细胞活力的影响,采用间接免疫荧光技术检测PK-15以及PK15-ISG15细胞感染PRV的增殖差异,通过 RT-qPCR 检测 PRV-EP0、PRV-gE、PRV-VP16 和 IFN-β 的转录水平,Western blot 检测 PRV-gE和ISG15的蛋白表达水平,以及通过病毒噬斑检测对子代病毒感染力的影响.结果表明,sgRNA1和sgRNA2均成功敲除ISG15基因;CCK-8试剂盒检测细胞活力结果表明,敲除ISG15基因对PK-15细胞活力无影响;间接免疫荧光检测结果表明,PRV感染后,PK15-ISG15-/-细胞中的荧光强度明显高于PK-15细胞;RT-qPCR和Western blot结果表明,敲除ISG15可以促进PRV的转录和蛋白表达;病毒噬斑试验进一步显示,敲除ISG15可以促进PRV的复制.另外,RT-qPCR结果显示,敲除ISG15可以抑制PRV感染引起的IFN-β转录上调.本研究成功构建了 PK15-ISG15-细胞系,并通过PRV感染试验证实ISG15基因可以抑制PRV在PK-15细胞中的增殖,并推测这种抑制作用可能与IFN通路有关.

关键词：CRISPR/Cas9、ISG15、猪伪狂犬病病毒、基因敲除

所属期刊栏目：53

分类号：S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;河南省高等学校青年骨干教师培养计划

在线出版日期：2022-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：3621-3630