可变剪接体WNT4-β对山羊卵泡颗粒细胞增殖和激素分泌的影响

摘要：

旨在研究WNT4的一个可变剪接体(WNT4-β)对山羊卵泡颗粒细胞增殖的影响.本研究选取4～6月龄健康母羊20只,采集双侧卵巢,体外分离卵泡颗粒细胞进行培养.通过免疫荧光染色技术确定WNT4-β的表达位置;在山羊颗粒细胞中过表达或干扰WNT4-β后,利用RT-qPCR、Western blot检测WNT4-β和WNT信号通路中关键标记因子ROA1、RHOA及颗粒细胞增殖标记基因cyclin-D2、CDK4的表达变化;CCK-8技术检测颗粒细胞增殖情况;并通过ELISA分析颗粒细胞中生殖激素水平的变化.免疫荧光染色结果显示,WNT4-β只在山羊卵泡颗粒细胞中表达,在卵母细胞不表达;过表达WNT4-β后,WNT4-β和颗粒细胞增殖因子cyclin-D2、CDK4的mRNA相对表达量极显著增加(P＜0.01),蛋白表达水平显著增加(P＜0.05);WNT信号通路标记因子ROA1、RHOA mRNA表达水平显著增加(P＜0.05),β-catenin蛋白表达水平显著增加(P＜0.05);干扰WNT4-β后,WNT4-β、cyclin-D2、CDK4、ROA1 和 RHOA 的 mRNA 表达显著降低(P＜0.05),WNT4-β、cyclin-D2、CDK4 及 β-catenin 蛋白表达显著降低(P＜0.05).CCK-8结果显示,过表达WNT4-β促进颗粒细胞增殖(P＜0.05);ELISA结果显示,过表达WNT4-β后,颗粒细胞中雌二醇(estradiol,E2)水平显著增加l(P＜0.05),孕酮(progesterone,P4)水平升高但不显著(P＞0.05);干扰WNT4-β后则结果相反,颗粒细胞增殖受到抑制(P＜0.05),E2和P4的水平显著降低(P＜0.05).综上所述,WNT4可变剪接体WNT4-β通过调控WNT信号通路促进山羊卵泡颗粒细胞增殖及类固醇激素分泌,本研究为解析WNT4调控山羊颗粒细胞增殖的潜在分子机制提供理论基础.

关键词：山羊、卵泡发育、颗粒细胞增殖、可变剪接体、WNT4-β

所属期刊栏目：53

分类号：S827.3(家畜)

资助基金：国家自然科学基金;现代农业产业技术体系;中国农业科学院科技创新工程;中国农业科学院科技创新工程

在线出版日期：2022-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：3480-3489