miR-138靶向PGC-1α调控牦牛肌内前体脂肪细胞增殖及分化

摘要：

旨在分析miR-138在耗牛前体脂肪细胞分化过程中的调控作用.本研究设计合成miR-138 mimics和in-hibitor 以对细胞进行miR-138过表达及抑制表达,并通过油红O染色分析miR-138对耗牛肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响;利用CCK-8、划痕和流式细胞技术分析miR-138对细胞增殖的影响;通过对bta-miR-138进行生物信息学分析,筛选其在脂质沉积过程中的相关潜在靶基因;利用RT-qPCR测定miR-138潜在靶基因mRNA表达水平,并通过双荧光素酶报告试验确定靶向关系.结果显示,过表达miR-138后,细胞内脂滴沉积水平显著低于对照(NC)组(P＜0.01),而抑制miR-138表达则显著增强脂肪细胞脂质沉积(P＜0.01);RT-qPCR结果表明,过表达miR-138可显著抑制脂肪分化标志基因PPARy和c/EBPα的表达(P＜0.01),抑制miR-138则上调PPARγ和c/EBPα表达水平(P＜0.05);此外,过表达miR-138后,潜在靶基因PTPN11、CREB1和ADCYAP1R1表达水平显著下调(P＜0.05),而PGC-1α和SNAP25表达极显著下调(P＜0.01);抑制miR-138后MXLIP和SNAP25表达显著上调(P＜0.05),PGC-1α和PTPN11表达极显著上调(P＜0.01);CCK-8和划痕试验结果表明,过表达miR-138后24～36 h,细胞增殖活性显著低于对照组(P＜0.05),而抑制miR-138则表现为细胞增殖活性增强;流式分析结果显示过表达miR-138后,细胞出现G1-S期阻滞,细胞周期相关基因CCND1、CCNB1和增殖标志基因Ki67的mRNA表达显著降低;生物信息学分析预测获得263个miR-138公共靶基因,KEGG富集结果显示靶基因主要参与"轴突导引"、"胰岛素抵抗"、"胰岛素分泌"及"RNA降解"等通路,GO 分析主要富集于"RNA聚合酶Ⅱ启动子对转录的正向调控"、"核染色质"、"染色质DNA结合"和"I型肺细胞分化"等功能;双荧光素酶报告试验结果显示,共转染miR-138 mimics和PGC-1α-Wt-PGL3-basic可显著降低细胞荧光强度(P＜0.01).以上结果表明,miR-138可通过靶向结合PGC-1α 3'UTR序列,降低PGC-1α的mRNA表达水平,抑制耗牛肌内前体脂肪细胞分化和脂质沉积,降低细胞增殖活性.本研究为阐明牦牛肉质性状的潜在分子机制提供参考.

关键词：耗牛、miR-138、PGC-1α、前体脂肪细胞、增殖分化

所属期刊栏目：53

分类号：S823.85(家畜)

资助基金：西南民族大学研究生创新科研项目;国家自然科学基金;国家肉牛耗牛产业技术体系项目;四川省科技计划

在线出版日期：2022-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共14页

页码：3434-3447