氯化钴通过诱发DNA氧化损伤抑制猪卵泡颗粒细胞增殖的研究

摘要：

旨在探究氯化钴(CoCl2)诱导的DNA氧化损伤对猪卵泡颗粒细胞增殖的影响.本研究选取猪卵泡颗粒细胞作为试验材料,使用化学性低氧模型诱导剂CoCl2处理猪卵泡颗粒细胞建立缺氧模型.前期研究已确定CoCl2最适处理浓度,用200 μmol·L-1 CoCl2处理猪卵泡颗粒细胞12 h,将培养出的传代细胞分成4组处理,分别为:对照组、CoCI2诱导缺氧处理组、GSH处理组、GSH+CoCl2联合处理组.对照组为完全培养基培养12 h,CoCl2诱导缺氧处理组给予终浓度200 μmol·L-1 CoCI2的培养基培养12 h,单独GSH处理组加入浓度为2 mmol·L-1的GSH处理12 h,GSH+CoCl2联合处理组加入200 μmol·L-1 CoCl2和2 mmol·L-1的GSH联合处理细胞后培养12h.12 h后检测各组细胞增殖活性、ROS水平、yH2AX蛋白活性水平和Oxo-8-G水平.采用CCK-8法检测其增殖活性;采用双氯荧光素(2',7'-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)检测 ROS 水平;Western blot 检测yH2AX蛋白活性水平,采用FITC荧光小鼠单克隆抗体检测Oxo-8-G水平.为了进一步明确CoCl2 诱导的颗粒细胞增殖阻滞与DNA氧化损伤的关系,本试验在CoCl2处理的基础上添加抗氧化物GSH处理12 h后检测细胞增殖、ROS水平、DNA氧化损伤等相关指标.与对照组相比,200 μmol·L-lCoCl2处理猪卵泡颗粒细胞后,细胞增殖活力极显著降低(P＜0.000 1),缺氧组ROS水平极显著升高(P＜0.000 1),γH2AX蛋白表达极显著升高(P＜0.000 1),Oxo-8-G水平极显著升高(P＜0.000 1).与缺氧组相比,在CoCl2处理基础上添加GSH后,ROS、Oxo-8-G、yH2AX水平极显著降低(P＜0.000 1),并伴随细胞增殖活性的显著恢复(P＜0.000 1)e CoCl2可抑制猪卵泡颗粒细胞增殖活性,机制与诱导DNA氧化应激损伤有关.

关键词：氯化钴、化学缺氧、猪卵泡颗粒细胞、细胞增殖、DNA氧化损伤

所属期刊栏目：53

分类号：S828.3(家畜)

资助基金：江苏省大学生创新训练计划项目;国家自然科学基金

在线出版日期：2022-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：2982-2992