鸡微粒体甘油三酯转运蛋白样基因生物学特性及表达调控

摘要：

旨在探究鸡微粒体甘油三酯转运蛋白样基因(MTTPL)生物学特性及其表达调控机制,为进一步探讨其在鸡肝脂质代谢中的生物学功能奠定基础.本研究首先采用PCR和测序技术,克隆MTTPL cDNA序列;利用在线软件对MTTPL蛋白结构域、三维空间结构及系统进化树进行分析;构建pcDNA3.1-MTTPL-EGFP过表达载体,通过与内质网标签蛋白的表达载体DsRed-λ共转染鸡肝癌细胞系(LMH)细胞,对MTTPL进行亚细胞定位;分别采集不同周龄卢氏绿壳蛋鸡(1日龄、1周龄、10周龄、30周龄每个周龄各8只)组织样,采用荧光定量PCR分析MTTPL基因和鸡微粒体甘油三酯转运蛋白基因(MTTP)的时空表达谱;然后用0.5、1和2 mg·kg-1体重浓度的17β-雌二醇分别处理海兰褐鸡(每组20只)12和24 h后,分析雌激素对肝MTTPL和MTTP表达的影响;最后用1、50、和100 nmol·L-117β-雌二醇及雌激素受体拮抗剂分别处理鸡胚肝原代细胞12 h(每组3个重复),研究雌激素调控MTTPL基因表达的作用机制.结果表明,鸡MTTPL的CDS区全长为2 646 bp,可编码881个氨基酸,与人和鸡MTTP拥有共同的祖先;定位于细胞内质网;鸡MTTPL和MTTP具有与人MTTP相同的功能域,且三维结构相似度偏差较小,分别为0.090和0.064;MTTPL基因在鸡肝和肾组织中高表达,MTTP在鸡肝、肾和小肠中高表达;在肝中,MTTPL和ApoB的表达水平随周龄的增加均显著上升(P＜0.05),而MTTP的表达仅在10周前随周龄增加显著升高(P＜0.05),而在产蛋前(10周龄)和产蛋期(30周龄)无显著变化(P＞0.05);在17β-雌二醇处理鸡12和24 h时后,MTTPL及ApoB在肝中均显著上调表达(P＜0.05),而MTTP在高浓度处理时表达量显著下调(P＜0.05),在低浓度时无显著变化;与对照组相比,雌激素可显著上调鸡胚肝原代细胞中ApoB和MT-TPL的表达(P＜0.05),而MTTP表达水平无显著变化;与雌激素处理组相比,雌激素及受体ERα拮抗剂MPP共处理组MTTPL基因表达水平显著降低(P＜0.05);与MPP和雌激素共处理组相比,ERα和ERβ受体拮抗剂ICI和TAM处理组MTTPL基因表达水平无显著变化.综上所述,鸡MTTPL位于内质网中,具有与人MTTP相似的功能结构域;MTTPL和M1TTP均在肝中相对高表达,且MTTPL在产蛋期鸡肝的表达显著高于产蛋前期,而MTTP无显著变化.雌激素可通过与ERα受体结合调控鸡MTTPL的表达,而MTTP不受雌激素调控.表明MTTPL可能在鸡产蛋期肝脂质代谢中发挥重要作用.

关键词：鸡、MTTP、MTTPL、脂质代谢、雌激素、脂蛋白

所属期刊栏目：53

分类号：S831.2(家禽)

资助基金：国家自然科学基金;河南省高等学校重点科研项目;河南省高校科技创新团队支持计划

在线出版日期：2022-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：2900-2911