猫源C11orf96基因表达及其在细胞中的定位分析

摘要：

本研究旨在通过克隆猫源C11orf96(Felis catus C11orf96,fC11orf96)基因,并制备其多克隆抗体分析该基因在细胞中的定位.以猫肾细胞cDNA为模板克隆fC11orf96基因,并利用无缝重组连接成功构建重组质粒pET-32a(+)-fC11orf96-Fe.随后将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后成功表达fC11orf96-Fe重组蛋白,并利用该重组蛋白制备多克隆抗体.最后利用Western blot及间接免疫荧光试验分析多克隆抗体的有效性及其细胞定位.结果表明,成功获得猫C11orf96基因CDS序列,全长372 bp,可编码124个氨基酸,表达的fC11orf96-Fe蛋白主要以包涵体形式存在,蛋白大小约49 ku.由该重组蛋白制备的多克隆抗体能够识别细胞内源性fC11orf96蛋白和外源真核表达蛋白,并且发现fC11orf96蛋白定位于细胞质.本研究成功克隆得到猫C11orf96基因,并且fC11orf96蛋白定位于细胞质,为后续研究C11orf96的生物学功能奠定了基础.

关键词：C11orf96、基因克隆、多克隆抗体、亚细胞定位

所属期刊栏目：53

分类号：S858.293;S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;上海市扬帆计划

在线出版日期：2022-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2390-2395