抗丝状支原体丝状亚种单克隆抗体的制备及初步应用

摘要：

旨在制备抗丝状支原体丝状亚种(Mmm)的特异性单克隆抗体(MAb),为牛传染性胸膜肺炎(CBPP)病原诊断的免疫学方法提供特异性抗体.本研究利用生物信息学技术分析了 Mmm国内分离株Ben-1不同传代株的全基因组序列,选取M0071蛋白作为研究对象.将原核表达的可溶性重组蛋白M0071(rM0071)作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过有限稀释法和间接ELISA方法筛选得到能稳定分泌抗rM0071蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株.进一步制备单抗腹水并纯化,利用Western blot方法对该单抗进行特异性鉴定,同时测定其抗体效价和抗体亚类.随后利用间接免疫荧光试验(IFA)评价该单抗对细胞感染Mmm的检测能力.结果表明成功获得1株单克隆细胞株3C4A1,将其分泌抗体命名为MAb 3C4A1.特异性结果表明,MAb 3C4A1能与Mmm的分离株和标准株发生特异性反应,而不与山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体、leachii支原体和牛A型巴氏杆菌等发生反应.抗体亚类鉴定MAb 3C4A1属于IgG1亚类、轻链为κ链.经间接ELISA测定其抗体效价为1:256 000.IFA试验结果表明,MAb 3C4A1仅与感染EBL细胞的Mmm发生绿色荧光反应,而与牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体感染的细胞不发生荧光反应,特异性良好.本研究制备的MAb 3C4A1具有良好的特异性和免疫反应性,可作为CBPP病原免疫学诊断的工具,为进一步研制CBPP病原鉴别诊断试剂盒提供了基础材料.

关键词：丝状支原体丝状亚种、M0071蛋白、单克隆抗体、间接免疫荧光检测

所属期刊栏目：53

分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2021YFD1800503

在线出版日期：2022-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：2290-2299