1株非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体识别的B细胞抗原表位的鉴定

摘要：

旨在研究非洲猪瘟病毒(ASFV)p30蛋白的B细胞抗原表位,本研究制备了 p30蛋白的单克隆抗体(mAb),并以该单克隆抗体为工具进行B细胞抗原表位定位.首先,通过原核表达及Ni柱亲和纯化获得p30蛋白,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞制备,通过间接酶联免疫吸附试验(iELISA)筛选出阳性杂交瘤细胞,并以细胞表达的方法制备单克隆抗体;采用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western blot)对单克隆抗体的特异性进行鉴定.利用IEDB表位预测软件对p30蛋白B细胞抗原表位进行预测,根据预测结果对CP204L基因进行截短表达,利用IFA、Western blot和iELISA对其抗原表位进行鉴定.最后,利用噬菌体十二肽库对制备的p30单克隆抗体进行4轮生物淘选,筛选多肽表位,并与上述基因截短表达筛选方法进行比对.特异性鉴定结果显示,该单克隆抗体能成功识别感染猪肺泡巨噬细胞的ASFV;基因截短表达筛选结果表明,其识别的抗原表位区域为84 M～K142;噬菌体淘选试验结果表明,116TSSFETLFE124为本试验制备的单克隆抗体所识别的p30蛋白抗原表位核心序列,该结果进一步缩小了表位分布范围.本研究制备了 p30蛋白的1株单克隆抗体,并对其抗原表位进行鉴定,为血清学诊断试剂的研发和p30蛋白功能研究奠定基础.

关键词：非洲猪瘟病毒、p30蛋白、单克隆抗体、生物淘选、抗原表位

所属期刊栏目：53

分类号：S855.3;S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：广东省重点领域研发计划;茂名实验室科研启动项目;国家自然科学基金;现代农业产业技术体系

在线出版日期：2022-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共13页

页码：2239-2251