猫疱疹病毒1型RPA-Cas12a-LFD检测方法的建立及初步应用

摘要：

猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus-1,FHV-1)为水痘病毒属的双链DNA包膜病毒,是引起猫上呼吸道感染的主要病原之一.本研究以重组聚合酶扩增(RPA)、Cas12a反式酶切反应和侧流层析试纸条(LFD)显示技术为基础,旨在建立靶向FHV-1 TK基因的RPA-Cas12a-LFD快速可视化检测方法.根据FHV-1 TK基因的保守片段序列设计RPA引物和合成crRNA的引物,并通过反应体系验证、RPA-Cas12a-LFD检测灵敏度和特异性分析,以及临床样本的符合检测,评价FHV-1 RPA-Cas12a-LFD方法的有效性.结果显示,建立的FHV-1 RPA-Cas12a-LFD方法可以特异性地检出FHV-1(与其他猫相关病原无交叉反应),灵敏度极高(最低检测限为2.35×10-1 copies·pL-1),检测时间短,结果可视化.该方法对20份表现明显症状的患猫呼吸道样本的FHV-1检出率(35％,7/20)高于现有的TB Green qPCR方法(25％,5/20),对其中5份阳性样本的检测符合率为100％.综上表明,成功建立的FHV-1 RPA-Cas12a-LFD检测方法的特异性好和敏感性极高,不需要特殊的检测设备,可以作为FHV-1现场快速检测的有效工具.

关键词：猫疱疹病毒1型、RPA-Cas12a-LFD、核酸检测、应用

所属期刊栏目：53

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：西南民族大学中央高校基本科研业务费专项;西南民族大学引进人才科研启动金资助项目

在线出版日期：2022-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1638-1643