人氨基肽酶N在猪丁型冠状病毒感染HEK293细胞中的作用

摘要：

以HEK293细胞为模型,探讨人氨基肽酶N(human aminopeptidase N,hAPN)在猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)入侵人源细胞中的作用.RT-qPCR/RT-PCR鉴定PDCoV在HEK293细胞上的增殖情况,再用CRISPR/Cas9技术构建敲除hAPN基因的HEK293细胞系,通过CCK-8试验验证敲除细胞和野生型细胞的细胞活性;用RT-qPCR和Western blot检测hAPN敲除和过表达对PDCoV复制的影响;进一步通过同源建模和分子对接预测PDCoV S蛋白和hAPN蛋白的结合位点.结果显示:PDCoV在感染HEK293细胞后12～36 h快速增殖,在36 h达到顶峰,在HEK293细胞上至少可传至2代;hAPN敲除细胞与野生型细胞的细胞活性无明显差异,细胞敲除hAPN可显著抑制PDCoV复制,细胞过表达hAPN可促进PDCoV复制;同源建模和分子对接表明,S1蛋白可与hAPN蛋白结构域II结合,主要是S1蛋白的受体结合基序1(receptor binding motif 1,RBM1)氨基酸残基 TYR92、THR51、THR48、PHE16和 MET14通过氢键与 hAPN 蛋白的氨基酸残基 PHE190、GLN531、ARG528和SER529结合.hAPN在PDCoV感染人源细胞中发挥重要作用,为深入研究PDCoV的细胞入侵和跨种传播机制提供了新的理论依据.

关键词：猪丁型冠状病毒、氨基肽酶N、HEK293细胞、复制

所属期刊栏目：53

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;四川省国际科技创新合作项目;云南省重大科技专项计划

在线出版日期：2022-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1587-1597