毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的原核表达与定位分析

摘要：

旨在探析毒害艾美耳球虫氧化还原酶EnOXIO1的功能.提取毒害艾美耳球虫扬州株配子体总RNA,应用RT-PCR获取EnOXIO1编码基因,构建原核表达载体pET-28a(+)-EnOXIO1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),体外诱导表达,对重组蛋白进行抗原性分析,应用制备的多抗进行激光共聚焦免疫荧光定位.结果显示,获得的EnOXIO1基因全长为2 535 bp,体外重组表达的蛋白大小约100 ku,主要以包涵体的形式存在,表达量约为0.5 mg·mL-1.Western blot分析结果显示,该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体识别,同时能被制备的鼠多抗以及毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明该重组蛋白具有较好的反应原性和交叉反应原性.激光共聚焦免疫荧光定位结果显示,EnOXIO1基因表达产物主要存在于配子体内的成壁体上,参与了卵囊壁的形成.本研究成功克隆和表达了毒害艾美耳球虫EnOXIO1蛋白,并将其定位于配子体和卵囊壁上,为进一步解析EnOXIO1蛋白参与卵囊壁形成的分子机制奠定基础,为研制新型免疫阻断型球虫亚单位疫苗提供重要靶抗原.

关键词：毒害艾美耳球虫、EnOXIO1、克隆表达、免疫荧光定位、功能鉴定

所属期刊栏目：53

分类号：S855.9;S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;江苏省高等学校自然科学研究面上项目;江苏高校优势学科建设工程项目

在线出版日期：2022-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1553-1561