非洲猪瘟病毒无标签p30-ELISA抗体检测方法的建立及应用

摘要：

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起猪的一种急性、热性、出血性、高度接触性传染病,临床症状以败血症、皮炎和关节炎为特征,高发病率和高死亡率.为建立临床检测ASFV抗体的间接ELISA检测方法,本研究扩增了 ASFV-CP204L基因,通过pET-30a原核表达系统表达p30蛋白,使用Ni-NTA纯化表达产物,通过肠激酶切除外源性蛋白,得到无His-组氨酸标签的p30蛋白,以此为诊断抗原,建立间接ELISA方法.结果显示:表达的无标签p30重组蛋白大小约为30 ku,与ASF阳性猪血清具有较好的反应原性;确定ELISA抗原包被浓度为1 μg·mL-1,根据ROC曲线下面积确定S/P值＞0.398判定为阳性,批内、批间变异系数均＜10％;与PCV2、CSFV、PRV-gE、PRRSV阳性血清无交叉反应与INGENASA商品化试剂盒总符合率为97.78％.用该方法分别检测标准阳性血清、动物感染试验血清和收集的区域性临床血清644份,该方法最低可检测到1 ∶ 512倍稀释的标准阳性血清样品;检测感染动物血清,其中80％(4/5)的试验动物在第10天抗体为阳性.644份临床猪血清样品中抗体阳性率为7.61％,其中,母猪、后备母猪、仔猪、保育猪和育肥猪抗体阳性率分别为3.03％、0％、4.94％、7.55％和28.7％.本试验建立的ASFV-p30间接ELISA方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可应用于ASFV的抗体检测,为ASF的诊断和流行病学调查提供了技术手段.

关键词：非洲猪瘟、CP204L基因、p30蛋白、原核表达、ELISA抗体检测

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分类号：S855.3;S852.659.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;湖北省技术创新专项

在线出版日期：2022-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1517-1526