猪子宫腔液外泌体来源的TIMP2蛋白对胚胎附植的影响

摘要：

旨在研究猪子宫腔液外泌体来源的TIMP2蛋白对妊娠早期胚胎附植的影响.本研究采用超速离心法分离妊娠第9天(n=3)和第12天(n=3)大白猪子宫腔液外泌体,利用Western blot(WB)检测外泌体中TIMP2蛋白的变化,并通过免疫组化试验研究TIMP2蛋白在子宫中的表达定位.进一步用外泌体与猪胚胎滋养层细胞(por-cine trophoblast,PTr2)共培养试验研究外泌体对TIMP2蛋白的靶向运输作用,最后在PTr2细胞中干扰和超表达TIMP2基因,利用CCK-8、EdU及划痕试验研究TIMP2蛋白对PTr2细胞增殖和迁移的影响.通过超速离心法成功分离到子宫腔液外泌体,其粒径主要分布在30～150 nm之间,WB试验结果表明,妊娠第12天猪子宫腔液外泌体中TIMP2蛋白含量显著增高(P＜0.05),外泌体与滋养层细胞共培养试验表明,TIMP2蛋白能通过外泌体靶向运输到滋养层细胞.免疫组化结果发现,TIMP2蛋白在子宫内膜和胚胎中均表达,且在妊娠第12天子宫内膜中的表达量极显著高于妊娠第9天(P＜0.01).进一步通过体外细胞试验发现,干扰PTr2中的TIMP2基因,细胞增殖能力极显著增强(P＜().01),迁移能力显著增强(P＜0.05);超表达该基因,细胞增殖能力极显著减弱(P＜0.01),迁移能力也显著减弱(P＜0.05).以上结果表明,子宫腔液外泌体来源TIMP2蛋白可能由母体子宫内膜所分泌,并能通过外泌体靶向进入胚胎滋养层细胞调控其增殖和迁移,从而影响胚胎附植.

关键词：外泌体、TIMP2、PTr2、胚胎附植

所属期刊栏目：53

分类号：S828.3(家畜)

资助基金：广东省自然科学基金;广东省乡村振兴战略专项

在线出版日期：2022-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1122-1132