牛ADIG基因启动子转录调控分析

摘要：

旨在构建脂肪生成素基因(adipohenin,ADIG)在牛不同组织中的表达谱,鉴定其核心启动子区域及关键转录因子,以期阐明其转录调控的分子机制.本研究采集3头((24±2)月龄)健康南阳公牛的心、肝、脾、肺、肾、肌肉和皮下脂肪组织,通过逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测各组织中ADIG基因的相对表达量;克隆获得牛ADIG基因上游启动子区2 245 bp序列,构建6个pGL3-WT,与pRL-TK共转染293T细胞、原代脂肪细胞和3T3-L1细胞,进一步利用生物信息学预测其核心启动子区的关键转录因子.结果发现,ADIG基因在南阳牛肺(P＜0.05)、肾(P＜0.05)和皮下脂肪(P＜0.05)组织中高表达;克隆得到2 245 bp及其6段缺失片段序列的ADIG基因的启动子序列,成功构建了pADIG-1 621/+59、pADIG-1 288/+59、pADIG-850/+59、pADIG-589/+59、pADIG-321/+59和 pADIG-79/+59双荧光素酶报告载体,并检测到牛ADIG基因启动子核心区域在-321/-79;生物信息学初步预测牛ADIG基因核心区域含有C/EBPα、PPARδ、CREB、STAT5和AP-2α等转录因子结合位点.综上,牛ADIG基因在皮下脂肪组织中表达量最高,其启动子核心区位于-321/-79,C/EBPα、PPARδ、CREB、STAT5和AP-2α等转录因子对ADIG基因转录活性具有调控作用.本研究结果为探究ADIG基因在肉牛分子水平上的改良培育提供理论依据.

关键词：南阳牛、ADIG基因、启动子、转录调控、双荧光素酶报告基因

所属期刊栏目：53

分类号：S823.2(家畜)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;宁夏回族自治区重点研发引才专项;宁夏回族自治区科技创新团队计划项目;现代农业产业技术体系建设项目

在线出版日期：2022-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：722-730