基于CRISPR/Cas9技术的Wip1基因敲除ST细胞的建立

摘要：

旨在采用CRISPR/Cas9编辑系统获得Wip1基因敲除的猪睾丸(swine testis,ST)细胞,为后续在细胞水平上探究Wip1基因对ST细胞增殖、凋亡的影响奠定基础.本研究将实验室已有的靶向Wip1基因第一外显子的两条sgRNA(sgWip1-1和sgWip1-2)分别连接到pX330-GFP和pX330-RFP载体,然后共转染ST细胞(从80～90日龄的猪胚胎睾丸组织中分离出未成熟的支持细胞).利用流式细胞仪收集红绿双荧光阳性的ST细胞,以用于单克隆细胞挑选.对得到的30个单克隆细胞进行基因型鉴定,并将PCR产物进行T-A克隆.结果显示,有29个单克隆细胞出现了基因片段敲除,Wip1基因的片段敲除效率为96.7％.其中单等位基因片段敲除的有5个,纯合双等位基因片段敲除的有8个,杂合双等位基因片段敲除的有16个.本研究高效地构建了 Wip1基因敲除的ST细胞,不仅为后续研究Wip1基因对ST细胞增殖、凋亡的影响提供了细胞模型,也为研究Wip1基因对公猪繁殖性能的影响奠定了基础.

关键词：CRISPR/Cas9 iWip1基因;ST细胞;猪

所属期刊栏目：52

分类号：S828.2(家畜)

资助基金：国家自然科学基金;中国农业科学院科技创新工程

在线出版日期：2021-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2814-2821